让你从零开始搞懂PCR实验室规划设计
之前有小伙伴问小编如何建一个标准的PCR实验室?PCR实验室如何设计规划才堪称专业?PCR实验室管理又有哪些注意要点?今天小编就帮你剖析PCR实验室规划设计标准,让你从0开始搞懂PCR实验室规划设计。
PCR实验室又叫基因扩增实验室。PCR (Polymerase Chain Reaction),中文翻译为聚合酶链式反应,取名效法“原子核裂变链式反应” 。其反应效果也是名符其实,通过一对预先设计的引物、耐热的DNA聚合酶以及反应原料,即可在体外模拟DNA复制的过程:
→首先将待扩增DNA模板加热变性解链;
→随之冷却至某一温度时,引物与待扩增模板序列发生退火结合;
→再将温度升高使退火引物在DNA聚合酶作用下得以延伸。
接下来介绍一下标准的PCR 实验室分为四个区域,分别为:
1.试剂配制区;
2.样品处理区;
3.核酸扩增区;
4.产物分析区;
设计要点
PCR实验室可以是分散形式,也可以是组合形式。完成一组PCR实验,通常应经过试剂配制、样品处理、核酸扩增及产物分析四个实验过程,若实验工艺需要,还应增加样品粉碎过程。
一、分散形式PCR实验室
所谓分散形式PCR实验室,是指完成上述实验过程的实验用房彼此相距较远,呈分散布置形式。对于这种布置形式的PCR实验室,由于各个实验之间不易相互干扰,因此无需特殊条件要求。
二、组合形式PCR实验室
所谓组合形式PCR实验室, 是指完成PCR四个实验过程的实验用房相邻布置,组成独立实验区域的形式。对于组合形式PCR实验室,由于各个实验间集中布置,容易造成相互干扰,因此,对总体布局以及屏障系统具有一定的要求。各室在入口处设缓冲间,以减少室内外空气交换。
基因扩增实验室又称PCR实验室,其特点是能将微量的DNA大幅增加,广泛应用于生物学各个领域。
PCR实验室原则上分为四个单独的工作区域:试剂准备区、标本制备区、扩增区和扩增产物分析区。为避免交叉污染,进入各个工作区域必须严格遵循单一方向原则,即只能从试剂准备区→标本制备区→扩增区→扩增产物分析区,不得逆向流动。
基本要求:
1、各区域必须是相互独立的;
2、各区域的仪器设备及各种物品必须是专用的;
3、各区完全独立,缓冲间可有可无。如为一个区套一个区的模式,区间不能直通,必须有缓冲间,保证两个区域间始终处于隔离状态;
试剂准备区:扩增试剂的配制,分装和保存,本区气压应保持微正压。主要设备有天平、冰箱、离心机、加样器、振荡器、紫外灯。
标本制备区:实验室样品的混样和测试样品的制备。工作区域为负压或减压,安装排风系统。主要设备有冰箱、生物安全柜、离心机、加样器、振荡器、恒温水浴、紫外灯。
扩增区:PCR扩增反应体系的配制和模板的加入,核酸扩增。工作区域为负压或减压,安装排风系统。主要设备有核酸扩增设备、冰箱、洁净工作台、离心机、加样器、紫外灯。
扩增产物分析区:扩增产物的测定。工作区为负压,安装排风系统。使用仪器有酶标仪、洗板机、加样器和水浴箱等。
PCR实验室规划图